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使用凝膠電泳如何可視化DNA
  • 發(fā)布日期:2021-05-19     信息來(lái)源:      瀏覽次數(shù):2039
    • 那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于使用凝膠電泳如何可視化DNA

             凝膠電泳是一種允許在其組成分子水平上分析DNA的技術(shù)。在這種DNA可視化方法中,將樣品放置在瓊脂糖凝膠介質(zhì)上,并在凝膠上施加電場(chǎng)。這會(huì)導(dǎo)致DNApian段根據(jù)其電化學(xué)特性以不同的速率通過(guò)凝膠遷移。

      溴化乙錠

      對(duì)于這種可視化技術(shù),在電泳前將溴化乙錠與瓊脂糖粉,EDTA緩沖液和水混合以形成凝膠基質(zhì)。結(jié)果,溴化乙錠分子變得均勻地分散在整個(gè)基質(zhì)中。一旦凝膠的孔中充滿了各自的DNA樣品和跟蹤染料,就可以施加電壓以緩慢地在基質(zhì)上吸引大的極性化合物。

      在此運(yùn)動(dòng)過(guò)程中,由于溴化乙錠電荷的作用,DNA分子的堿基暫時(shí)結(jié)合到了顆粒上,并將其拖動(dòng)。到凝膠電泳完成時(shí),每個(gè)DNA分子都吸收了大量的溴化乙錠。

      在紫外光存在下,溴化乙錠顯示出熒光。技術(shù)人員會(huì)在凝膠上照射經(jīng)過(guò)特殊校準(zhǔn)的紫外線,而機(jī)器會(huì)捕獲發(fā)光碎片的圖像。

      亞甲藍(lán)

      如果沒(méi)有紫外線透射器或不實(shí)用,則技術(shù)人員可以通過(guò)將完成的瓊脂糖凝膠(其中帶有電泳的DNA)浸泡在亞甲基藍(lán)溶液中過(guò)夜,使DNA在正常條件下可見(jiàn)。

      具有明顯疏水性的陰離子亞甲基藍(lán)分子的氯化物鹽會(huì)滲透整個(gè)凝膠基質(zhì)。但是,整個(gè)DNA中的氫鍵會(huì)導(dǎo)致染色分子積聚。DNA染色密度的增加會(huì)產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的深藍(lán)色陰影。

      追蹤染料

      除了DNA條帶的相對(duì)大小之外,技術(shù)人員還可以使用稱為跟蹤染料的化學(xué)物質(zhì)來(lái)測(cè)量每個(gè)片段的**對(duì)大小(以堿基對(duì)為單位)。在不添加亞甲基藍(lán)或溴化乙錠的情況下可見(jiàn),在電泳過(guò)程中,示蹤染料(如溴酚藍(lán)和二甲苯氰)在瓊脂糖凝膠基質(zhì)上移動(dòng)的速度與分別由300個(gè)核苷酸和4,000個(gè)核苷酸組成的DNApian段相同。在電泳中,更大的DNApian段比較小的片段穿過(guò)凝膠基質(zhì)的速度要慢。因此,盡管示蹤染料不會(huì)直接影響DNApian段的可見(jiàn)性,但將DNApian段在凝膠中的位置與這些染料的位置進(jìn)行比較,可使技術(shù)人員“看到”該DNApian段所含核苷酸的大概數(shù)量。

       

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