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蛋白純化常見問題(一)
  • 發(fā)布日期:2022-12-15     信息來源:      瀏覽次數(shù):2069
    • 那么下面上海嘉鵬科技有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下蛋白純化常見問題(一)。
      Q:如何去除樣品中的 DNA/RNA 等核酸雜質(zhì)污染?
      A:延長(zhǎng)超聲時(shí)間以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同時(shí)消化 DNA 和 RNA。如果來源是大腸桿菌裂解液,含有大量的DNA,可以用鏈霉素沉淀等方法,預(yù)先去除大量的 DNA。
      通過層析方法去除 :由于核酸帶負(fù)電,在陰離子柱上會(huì)結(jié)合或陽離子柱上流穿,也可以有效去除核酸。
      去除填料上結(jié)合的核酸 :一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 對(duì)核酸的去除效果較好。如果核酸的吸附過強(qiáng),會(huì)采用強(qiáng)烈的方法,3M NaCl可去除靠靜電吸附的核酸,然后用 1M NaOH分解核酸,之后再用 3M NaCl 清洗。

      Q:柱子有色素如何去除?
      A:
      色素性質(zhì)較復(fù)雜,可以根據(jù)填料的耐受情況,嘗試使用高鹽、NaOH、有機(jī)溶劑(如 30% 異丙醇或乙醇)或酸(如 0.01 M HCl)處理,*好將填料拆出,分別浸泡在不同試劑中。
      也可以考慮使用混合試劑進(jìn)行處理,例如:通過混合8M尿素 + 0.5 M 乙酸 + 2 M NaCl,對(duì)于和陰離子交換等介質(zhì)緊密結(jié)合的化合物,通常很有效;或者1 M NaOH混合1-2 M 鹽;可以耐受有機(jī)溶劑的情況下,嘗試1 M NaOH混合20-30%的異丙醇;根據(jù)色素的不同性質(zhì),也可以嘗試不同的去污劑,注意避免操作中產(chǎn)生氣泡。
      如果去除不掉,可以定期把色素污染部分的填料去除,或驗(yàn)證是否對(duì)于樣品純化造成影響。

      Q:柱子堵了、超壓如何處理?
      A:可能原因 :緩沖液或樣品未進(jìn)行過濾、蛋白沉淀或雜質(zhì)殘留、清洗不及時(shí)等引起層析柱濾膜堵塞 ;流速過快、流動(dòng)相粘度 ( 如乙醇等 ) 過高、溫度過低。
      建議處理方法 :首先將柱子卸下來,確定是系統(tǒng)還是柱子堵了。如果是柱子堵了 :參考說明書 CIP 操作進(jìn)行清潔 ;更換層析柱頂端濾膜或超聲清洗 (Hitrap,HiPrep 與 Precision Columns 3.2/300 柱型均不能拆卸換膜 ) ;必要時(shí)移除層析柱頂端 2-3mm 凝膠,調(diào)節(jié) Adaptor消除頂端死體積。部分預(yù)裝柱,也可以將填料倒出,去除板結(jié)或碎填料后,重新裝填。測(cè)定柱效或重復(fù)之前做過的樣品。后續(xù)注意樣品前處理(包括上柱子前的離心或過濾處理、優(yōu)化利于樣品穩(wěn)定存在的緩沖液條件、核酸等粘稠雜質(zhì)的去除等)以及層析柱的日常維護(hù)。

      以上就是上海嘉鵬科技有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白純化常見問題(一)。
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