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超微量光度計的蛋白質(zhì)直接定量
  • 發(fā)布日期:2022-12-15     信息來源:      瀏覽次數(shù):1845
    • 超微量光度計已成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及生長濃度的定量。
            這種方法是在280nm波長,直接測試蛋白。選擇Warburg 公式,光度計可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應(yīng)的換算方法,將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì),一般要消除320nm 的“背景"信息,設(shè)定此功能“開"。與測試核酸類似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,合適的線性范圍在1.0-1.5 之間。實驗中選擇Warburg 公式顯示樣品濃度時,發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移"。這是一個正常的現(xiàn)象。事實上,只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%,表明結(jié)果非常穩(wěn)定。漂移的原因是因為Warburg 公式吸光值換算成濃度,乘以一定的系數(shù),只要吸光值有少許改變,濃度就會被放大,從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說,速度快,操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。


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